Aislamiento de hongos filament=
osos
en suelos de Cerro Canajagua provincia de Los S=
antos
y su potencial uso como biocontroladores
Emily Espino1*, July Concepción2*, Alexis de la Cruz3=
*
1,2Estudiantes
de Recursos Naturales, Universidad Católica Santa María La Antigua
3Profesor
de Microbiología, Universidad Católica Santa María La Antigua
*Autor para
Correspondencia. E-mail: alexisdelac@gmail.com<=
/span>
=
Recibido: 19 de febrero de 2020
Aceptado: 23 de marzo de 2020
___________________________________________________=
__________________________________
Resumen
Los hongos del suelo
desempeñan funciones en los procesos de descomposición que mineralizan y
reciclan nutrientes de plantas. En el suelo, los hongos interactúan con una
compleja comunidad microbiana que incluye: bacterias, actinomicetos (actino
bacterias) y pequeños invertebrados. Los hongos son una parte importante de=
la
cadena alimenticia en el suelo, principalmente para la meso fauna que habit=
a en
el suelo (Bonkowski et al., 2000). Esta evaluación consistió en recole=
ctar
muestras de suelo, hojas y troncos en distintas áreas de la provincia de Los
Santos, aislando hongos para el uso como control biológico contra
microorganismos como Garrapatas de perro (Rhipicephalu=
s
sanguineus) y Gorgojos (Cu=
rculionidae),
la mayor ocurrencia de aislamiento fue de Aspergillus =
spp
con un 55%, siendo efectivos en 415 de infectividad sobre Rhiphicephalus
sanguineus (garrapatas). Se concluye que hay un=
a gran
diversidad de hongos para control biológico.
Palabras Clave: Hongos
Filamentosos, Cerro Canajagua, Controlador biológico.
Abstract
Soil fungi play roles in decomposition processes t=
hat
mineralize and recycle plant nutrients. In the soil, fungi interact with a
complex microbial community that includes: bacteria, a=
ctinomycetes
(actinobacterias) and small invertebrates. Fung=
i are
an important part of the food chain in the soil, mainly for mesofauna
living in the soil (Bonkowski et al., 2000). Th=
is
evaluation consisted in collecting soil samples, leaves and logs in differe=
nt
areas of the province of Los Santos, isolating fungi for use as biological
control against microorganisms such as dog ticks (Rhip=
icephalus
sanguineus) and weevils (C=
urculionidae),
It is concluded that there is a great diversity of fungi for biological
control.
Keywords: Filament
fungi, Cerro Canajagua, Biological controller.
Los
Hongos filamentosos están formados por una serie de ramas tubulares llamadas
hifas, el conjunto de las cuales forman el micelio. Se reproducen por la
formación de esporas, las cuales pueden ser pigmentadas y le dan el color a=
l hongo.
Se caracterizan por presentar crecimiento
rápido, tener reservorios naturales en el suelo, plantas, animales y vegeta=
les
muertos, crecen a temperaturas de 25 – 30°C y sus esporas o conidios son
transportados por el aire, son normalmente inhalados y presentan gran
resistencia en el medio ambiente.
La
mayoría de los hongos filamentosos de interés clínico y vegetal, tienen una
fase de reproducción sexuada (telomorfa), pero =
es su
forma asexual (Anam órfica) la que casi siempre produce las enfermedades y =
es
observada en las muestras, (Makron Books, 1997).
Control
biológico. Es un método de control de plagas, enfermedades y malezas que
consiste en utilizar organismos vivos con objeto de controlar las poblacion=
es
de otro organismo. Posee muchas ventajas entre las que se pueden destacar, =
la
resistencia de las plagas al control biológico. (Sanidad vegetal. Colectovo de autores, 1992).
Las
mayores abundancias de hongos se hallan en las capas u horizontes superfici=
ales
del suelo, donde el microclima, ambiente y disponibilidad de recursos
nutricionales son favorables para el desarrollo y crecimiento de hongos (Lavelle & Spain 2001)=
, pero
escasos a causa de la compactación de los suelos, agricultura convencional y
aplicación de sustancias químicas (Coyne 2000).=
Los
hongos del suelo de regiones áridas, semiáridas, hasta en regiones tropical=
es
no han sido estudiados ampliamente (Christensen=
1969,
Flanagan 1981, Domsch et
al. 1980).
En
zonas áridas son característicos los hongos de los géneros Aspergillus y Penicillium (Flanagan 198=
1) Penicillium es abundante en temperaturas y climas frí=
os,
mientras Aspergillus predominan en climas templados, sin embargo, todos los
hongos son regulados por la cantidad y calidad del sustrato (Paul 2007).
El
Objetivo de esta investigación fue aislar hongos de suelo, para ser usado c=
omo
controladores biológicos.
2
Materiales y Métodos
2.1 Áreas de Estudios
Las
áreas del estudio se localizaron en Cerro Canajagua,
Provincia de Los Santos, República de Panamá, ubicado geográficamente entre=
las
coordenadas 7º37´18” N 80º25´31” W / 7.62165, -80.42538
La
caracterización, tiene aproximadamente 830Mts sobre el nivel del suelo natu=
ral,
con una vegetación de más de 47,000 hectáreas, tierras privadas semi protegidas, con una variedad de árboles nativos y
flores.
Palmira, ubicado geográficamente entre las
coordenadas 7º40´40” N 80º21`00” W
Nuario,
ubicado geográficamente entre las coordenadas 7.5333ºN 80.3333ºW
El Oro, ubicado geográficamente entre las coo=
rdenadas
Flor Amarilla, ubicado geográficamente entre =
las
coordenadas 7º40´0” N 80º´23”0W
2.2 Toma de muestra en campo
Nos
dirigimos hacia los 5 lugares de muestreo, donde colectamos diferentes tipo=
s de
hojas, troncos y suelo. En total se recolectaron 16 muestras. colocamos cada
tipo en un sobre, rotulamos por tipo de muestra y lugar, las muestras de su=
elo
se añadieron en bolsas ziploc. Se almacenaron e=
n el
laboratorio para luego ser procesadas.
2.3 Procesamiento de las muestras en el
laboratorio
Para
empezar el proceso se recortaron 5 cuadros por cada muestra, pasaron a ser
desinfectados bajo el orden de vasos químicos que contenían agua con cloro+agua+alcohol+agua, se dejaron secar por 10 minu=
tos.
Se preparó el medio de cultivo con Difco Sabouraud, colocándolo luego en el auto clave par=
a que
se solidificara. Se procedió a llenar los platos Petri hasta la mitad dejan=
do
enfriar, sembrar los 5 cuadros de hojas por cada muestra que
fueron extendidas sobre la superficie de los medios de cultivo papa dextros=
a agar
(PDA), rotular según su procedencia, las incubamos por 7 días a una tempera=
tura
de 30º C. Para el cultivo de muestras de suelo colocar 4 tubos de ensayo en
gradilla, poner 10ml de agua destilada en cada uno, preparamos el medio en =
los
platos Petri, pesamos 0.1g de cada muestra en la cámara de bioseguridad con=
un isopo recolectamos la muestra, colocamos en cada plat=
o e
incubar por 7 días a 30º C.
Al
pasar los 7 días observamos el crecimiento de cada muestra, posteriormente
de acuerdo al color, forma, con un aza bacteriológica se hizo el repique a =
un
medio definitivo (PDA) e incubadas por 7 días a 30º.
2.4 Descripción macro y microscópicas.
Las
características macroscópicas de las UFC s se describieron según Watanabe (2010), fueron descritos a los siete días de=
spués
de la incubación por el anverso y re-verso que presentaban las UFC s en caja
Petri, por Anverso, de acuerdo a las características del cultivo como: i) c=
olor
de la superficie y contorno de la colonia, ii) textura, iii) color del pigm=
ento
exudado y iv) forma de la colonia y del margen, Reverso, de acuerdo i) al c=
olor
de la parte interior, media y borde de la colonia, ii) superficie interior y
iii) exterior de la colonia Para observaciones preliminares del hongo
filamentosos al microscopio, se empleó la técnica de la cinta pegante (Díaz=
et
al. 1999), que consiste en extraer fragmentos de la colonia presionando
suavemente el lado pegante de la cinta sobre el micelio aéreo del hongo y p=
oner
la cinta sobre porta objetos con una gota de azul de metileno y observar al microscopio las características
morfológicas del micelio y órganos reproductivos con aumentos de 40X para su
identificación taxonómica de género.
La
identificación de géneros de hongos filamentosos fue realizada con la técni=
ca
de micro cultivo (Díaz et al. 1999), posteriormente se observó al microscop=
io
las estructuras de los hongos filamentosos, se fotografío el micelio y
estructuras reproductivas, las fotografías fueron comparadas con descripcio=
nes
originales. La identificación taxonómica presumible de los géneros de hongos
filamentosos fue tomando en cuenta las características microscópicas, luego=
se
comparó con la literatura de claves taxonómicas de Bar=
nett
& Hunter 1998, Kirk et al. 2008, Watanabe 2=
010, Samson et al. 2014. Aquellas No identificados fueron
denominados como cepas notipificadas.
Procedimos
al enfrentamiento Entomopatógeno con garrapata =
(Rhipicephalus sanguineus) y
Gorgojos (Curc=
ulionidae)
con las esporas de cada hongo aislado, se incubaron por 7 días a 30º C. Lue=
go a
través del microscopio se observó cual tipo de hongos resulto ser agente
patógeno con los diferentes organismos.
3
Aislamiento e Identificación
Capacidad Entomopatógena
Los
hongos una vez aislado e identificados fueron diluidos en agua destilada
estéril e inóculos de esporas se colocaron en tubo de ensayos, en cada tubo=
se
colocó un espécimen de garrapata (Rhipicephalus sanguineus) y Gorgojos (Curculionidae), se aislaron=
en
tubos vacíos a una temperatura de 30º por 7 días, se procedió a observar si=
se
presentaba signos de ataque o infección por hongos.
4
Resultados y Discusión
![](3D"03AlexisDeLaCruz_archivos/image002.jpg")
=
Tabla 1. Contr=
ol de
la cantidad de muestras tomadas en las diferentes ubicaciones para el proye=
cto.
![](3D"03AlexisDeLaCruz_archivos/image004.jpg")
=
Figura
1. Áreas con mayor cantidad de hongos.
El Área que mayor porcentaje de hongos fue el Cerro Canajagua
con un 32%, luego Nuario y Palmira que se detec=
tó un
21% de hongos, en Flor Amarilla un 16% y El Oro con solo 10% de afectación =
por
hongos filamentosos.
Antagónica
![](3D"03AlexisDeLaCruz_archivos/image006.jpg")
Tabla
2. Prevalencia de hongos según su ubicación
Podemos
observar que el hongo que prevaleció el Aspergillus
con un 55%, Metarhizium 10%, Penicillium 10%, Cholelutrichum 10%, Rhizopous 5%, Fusarium 5% y Geotrichum 5%. <=
/span>
![](3D"03AlexisDeLaCruz_archivos/image008.jpg")
=
Figura 2. Cantidad de insectos y su
infección
Se
colocaron a enfrentar 10 Rhipicephalus sanguineus y
13 Curculionid=
ae
La
cantidad de Rh=
ipicephalus sanguineus infectadas
por hongos fue de un 41%, Infección de hongos en Curculionidae fue de 32%, No se observó reacción en un 27%.
![](3D"03AlexisDeLaCruz_archivos/image010.png")
![](3D"03AlexisDeLaCruz_archivos/image012.png")
<=
/span>
<=
/span>
<=
/span>
<=
/span>
<=
/span>
Figura3.
Rhipicephalus sanguineus y Curculionidae infectados por hongos.
![](3D"03AlexisDeLaCruz_archivos/image014.jpg")
De
11 tubos con R=
hipicephalus sanguineus fueron
atacadas 7 de ellas con Aspergillus y de 12 tubos con =
Curculionidae se infectaron 9 con diferentes hongos como Rhizopous,
Metarhizium, Penicillium
entre otros.
Figura
6. Observaciones microscópicas Entomopatógena
5
Conclusiones
-Se
concluye que se determinó una gran cantidad de hongos en las 5 ubicaciones =
de
muestreo.
-Entre
todos los hongos aislados el más dominante fue el Aspergillus.
-Las
Rhipicephalus<=
/i> sanguineus resultaron
ser más infectadas con Aspergillus.
-El
sitio más afectado con presencia de hongos fue el Cerro Canajagua.
6
Agradecimientos
Primeramente,
darle gracias a Dios todopoderoso por mantenernos con salud, motivación y
dedicación para llevar a cabo este proyecto.
Al
Ministerio de Salud por permitirnos desarrollar la fase experimental del
proyecto en el Laboratorio de Calidad de Agua en la Villa De Los Santos.
7
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